【cck8实验原理】CCK-8（Cell Counting Kit-8）是一种广泛应用于细胞活力检测的试剂，其核心原理基于WST-8（2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸基)-2H-四唑单钠盐）在细胞线粒体脱氢酶的作用下被还原为水溶性的黄色甲臜（Formazan）产物。该产物在450 nm波长处具有较强的吸光度，可以通过分光光度计或微板读数仪进行定量分析，从而反映细胞的存活状态和增殖能力。
CCK-8实验因其操作简便、灵敏度高、重复性好等优点，被广泛应用于药物筛选、细胞毒性研究、肿瘤生物学等多个领域。
CCK-8实验原理总结
| 项目 | 内容 |
| 实验名称 | CCK-8实验 |
| 主要成分 | WST-8（2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸基)-2H-四唑单钠盐） |
| 作用机制 | WST-8被细胞线粒体中的脱氢酶还原为水溶性甲臜，其生成量与活细胞数量成正比 |
| 检测波长 | 450 nm（吸光度测量） |
| 检测原理 | 通过吸光度变化间接反映细胞活性 |
| 适用对象 | 活细胞 |
| 优点 | 操作简便、灵敏度高、无放射性、可重复性强 |
| 缺点 | 对于某些特定细胞类型可能不适用；需避免强光照射 |
实验流程简述
1. 细胞接种：将待测细胞接种至96孔板中，培养至适当密度。
2. 加药处理：根据实验设计加入不同浓度的药物或其他处理因素。
3. CCK-8试剂添加：在培养结束后，向各孔中加入适量CCK-8试剂。
4. 孵育反应：将板置于恒温培养箱中孵育一定时间（通常为1–4小时）。
5. 测定吸光度：使用酶标仪在450 nm波长下测定各孔的吸光度值。
6. 数据分析：根据吸光度值计算细胞存活率或抑制率。
注意事项
- 实验过程中应尽量避免光线直射，防止WST-8分解。
- 不同细胞系对CCK-8试剂的反应可能存在差异，建议先进行预实验优化条件。
- 试剂应保存在避光、低温环境中，以保持其活性。
通过以上原理和步骤，CCK-8实验能够高效、准确地评估细胞的活性状态，是细胞生物学研究中不可或缺的工具之一。
